Uso de la microdisección láser para inducir daño al DNA en células vivas

Octubre 26 | 11:00 am - 12:00 pm

Carl Zeiss de México lo invita al seminario web sobre Uso de la microdisección láser para inducir daño al DNA en células vivas

Únase con los miembros de la Unidad de Aplicaciones Avanzadas en Microscopía del Instituto Nacional de Cancerología y la Red de Apoyo a Ia Investigación, Dr. Alejandro López Saavedra, Dr. Diego Oliva-Rico & Biol. Fernando Luna, el 26 de octubre a las 11:00 a.m.

Temas principales:

  • Moléculas de respuesta a daño al DNA
  • Microirradiación láser para inducir daño en células vivas
  • Microscopía de microdisección láser
  • Inmunotinción y microscopía confocal para revelar daño al DNA

Resumen

El DNA genómico es continuamente dañado por diversos factores endógenos o exógenos, como los radicales libres, la radiación UV, la radiación ionizante, entre otros. Una vez que ocurre el daño, el sistema de Respuesta al Daño al DNA (DDR, por sus siglas en inglés) se encarga de detectar, detener el ciclo celular, reparar el daño o inducir apoptosis si este no puede repararse. El DDR está formado por proteínas sensoras, transductoras, adaptadoras y efectoras. La falla en el proceso de reparación del DNA puede llevar a la muerte celular o desencadenar procesos de carcinogénesis.

Para estudiar el daño al DNA se han desarrollado diversas técnicas para generarlo en células vivas cultivadas in vitro. Una de ellas, la microirradiación local con láser UV se usó por primera vez hace más de 40 años para determinar la organización de las regiones cromosómicas y últimamente se ha usado para el estudio del daño al DNA por medio de microscopía confocal principalmente. Sin embargo, esta técnica ha dependido en gran medida del acceso a instrumentos equipados con láser UV y de incubación de células vivas, lo que puede significar un alto costo económico para el investigador.

De manera alternativa, en la Unidad de Aplicaciones Avanzadas en Microscopía del Instituto Nacional de Cancerología y la Red de Apoyo a la Investigación (RAI) estandarizamos un protocolo para generar daño localizado al DNA, sin alterar la viabilidad celular, a través del uso de microscopía de microdisección láser (PALM, ZEISS), típicamente usada para el corte de tejidos fijados sobre laminillas. En lugar de usar un láser UV de microscopía confocal, que por lo general es costoso, se ajusta la potencia y distancia focal del láser de baja energía de microdisección para hacer microirradiación en una región de interés en el núcleo de las células vivas, induciendo así el daño al DNA. Posteriormente, las proteínas involucradas en la vía DDR, o bien cualquier proteína involucrada en daño al DNA que sea de interés para el investigador, pueden ser detectadas por inmunofluorescencia en un microscopio convencional con iluminación epifluorescente.

 

Ponentes

Dr. Alejandro López Saavedra
Responsable de la Unidad de Aplicaciones Avanzadas en Microscopía (ADMiRA) del Instituto Nacional de Cancerología (INCan) y la Red de Apoyo a Ia Investigación (RAI).

Formación como ingeniero bioquímico, maestro en ciencias biológicas y doctor en ciencias biomédicas por la UNAM. Actualmente es investigador en ciencias médicas C en el Instituto Nacional de Cancerología, cuenta con 15 publicaciones en revistas internacionales y ha formado estudiantes de licenciatura y posgrado. Ha obtenido cursos de capacitación en microscopía confocal, súper resolución y Lightsheet en Carl Zeiss Alemania (Jena y Múnich) y Carl Zeiss México. Actualmente proporciona apoyo técnico y científico en microscopía a la comunidad clínica y biomédica de diversas instituciones que requieren de los servicios de la Unidad de Aplicaciones Avanzadas en Microscopía.

 

Dr. Diego Oliva-Rico
Miembro de la Unidad de Aplicaciones Avanzadas en Microscopía (ADMIRA) del Instituto Nacional de Cancerología (INCan) y la Red de Apoyo a Ia Investigación (RAI).

Licenciatura en investigación biomédica básica y doctorado en ciencias biomédicas por la Universidad Nacional Autónoma de México. Estancia de capacitación en microdisección, micromanipulación y microscopía electrónica de barrido/transmisión en Carl Zeiss Múnich, Alemania. Actualmente proporciona apoyo en esas técnicas de microscopía y colabora en proyectos del área de carcinogénesis y biología molecular del cáncer, apoyando el trabajo de alumnos e investigadores del Instituto de Investigaciones Biomédicas y la Facultad de Medicina de la UNAM, del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, y del Instituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición Salvador Zubirán.
 

Biol. Fernando Luna
Biólogo egresado de la Facultad de Ciencias de la UNAM.

Actualmente, realiza su Doctorado en Ciencias Biomédicas de la UNAM en el laboratorio de Carcinogénesis del Dr. Luis A. Herrera en el Instituto Nacional de Cancerología. De 2016 a 21019 fue presidente de la sociedad de alumnos del Colegio Mexicano para la Investigación del Cáncer (c-MIC). Su proyecto de doctorado está enfocado en describir la posible función y los mecanismos por los cuales las proteínas de mitosis pueden estar participando en la respuesta al daño al DNA durante la interfase en células de cáncer.
 

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